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El género Trichomycterus comprende numerosas especies, la mayoria de las cuales son endémicas en áreas serranas y montañosas de Sud América. Hasta el presente existen pocos trabajos sobre aspectos citogenéticos del género. Es por lo tanto nuestro objetivo contribuir al conocimiento citogenético del género, comenzando por T. spegazzini, especie de amplia distribución en la Provincia de Salta, Argentina en áreas punena y de Chaco serrano. Los análisis se efectuaron sobre 2 machos y 5 hembras capturados en el río Calchaquí, (a 2.800 m snm) Salta, Argentina, perteneciente a la cuenca del río Juramento, el cual a su vez pertenece a la cuenca hidrográfica del río Paraná. Se aplicaron distintas técnicas para la obtención de preparaciones cromosómicas, siendo las más satisfactorias las técnicas de inyección intraperitoneal de colchicina y de incubación en solución de Hanks. Los organizadores nucleolares se evidenciaron por el método de tinción con Plata y la heterocromatina constitutiva mediante el método del hidróxido de Bario. Del análisis de los resultados obtenidos se concluye que T. spegazzini presenta un número diploide modal 2n=54, tanto machos como hembras, presentan cromosomas de tipo metacéntrico y submetacéntrico. Muestran las NORs en posición terminal en un solo par de cromosomas. No fueron detectados diferencias cromosómicas relacionadas con el sexo de los ejemplares